NEST玻底培養(yǎng)皿和玻底培養(yǎng)板使用方法

近日來(lái)很多客戶向我們咨詢NEST玻底皿/板的使用方法，這里我們將NEST玻底皿/板的常規(guī)使用方法刊登出來(lái)供大家參考。

1 預(yù)平衡：在玻底培養(yǎng)皿加入3ml培養(yǎng)液，在培養(yǎng)箱中放置15分鐘。

2 加細(xì)胞：吸去培養(yǎng)液，在底孔中加入500ul含細(xì)胞的培養(yǎng)液。在培養(yǎng)箱中放置2小時(shí)，

讓細(xì)胞沉降貼壁。

3 加培養(yǎng)液：小心加入2-3ml不含細(xì)胞的培養(yǎng)液。該步驟用于為細(xì)胞提供足夠的培養(yǎng)

液，同時(shí)減少由于水份揮發(fā)帶來(lái)的滲透壓的變化。

*根據(jù)實(shí)驗(yàn)的要求，可以合并步驟2和3，在預(yù)平衡后直接加入2-3毫升含細(xì)胞的培養(yǎng)液。

多聚賴氨酸包被

1. 將濃度0.01%（100ug/mL）的多聚賴氨酸溶液加入玻底板或玻底皿中（爬片可置于普通皿內(nèi)進(jìn)行加液），以剛好蓋滿玻底（或玻片）為準(zhǔn)，將上蓋蓋好，放到培養(yǎng)箱中(37℃ 5%CO2)包被30分鐘。

2. 30分鐘后取出板或皿，用吸管將多余的多聚賴氨酸溶液吸出。換吸管，加入三蒸水，沒(méi)過(guò)底，沖洗三次，再將水吸出來(lái)。反復(fù)三次。整個(gè)過(guò)程需在無(wú)菌操作臺(tái)上進(jìn)行，并且保證吸管無(wú)菌。

3. zui后將鋪好的板（或皿）放于培養(yǎng)箱待用。

多聚賴氨酸及明膠包被方法

多聚賴氨酸（分子量30000-70000），用0.1M硼酸 /NaOH緩沖液PH8.4 （高壓滅菌）做100倍稀釋成200μg/mL應(yīng)用液，0.22μm濾膜（可用一次性針頭過(guò)濾器CA 0.22μm）過(guò)濾。PLL滴加于培養(yǎng)面上，保證全部覆蓋，室溫guoye。次日吸去多余部分（可回收），雙蒸水洗兩遍，置于超凈臺(tái)中紫外線下風(fēng)機(jī)吹干即可。

明膠母液（2%濃度）用去離子水稀釋成濃度1%（或0.1%，有條件的建議多嘗試下，確定zui符合自己用的濃度），國(guó)產(chǎn)或進(jìn)口均可。建議配置好的包被液做一次高溫高壓滅菌。將包被液滴加在培養(yǎng)面上，保證全部覆蓋，37℃包被1~2小時(shí)，或4℃冰箱guoye，待用時(shí)取出吸去多余部分，可用培養(yǎng)液清洗1~2次后使用