NEST細(xì)胞培養(yǎng)是從事微生物學(xué)及生命科學(xué)研究的基本材料，在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中，診斷制品的制備，菌苗的生產(chǎn)、微生物致病性研究，藥物的抑菌試驗及藥品微生物檢驗等都有一套完整的菌種菌種分為母種(一級種)、原種(二級種)和栽培種(三級種)三級。
 

　　NEST細(xì)胞培養(yǎng)的凍存:為避免污染造成的損失，至小化連續(xù)細(xì)胞系的遺傳改變和避免有限細(xì)胞系的老化和轉(zhuǎn)化，需要凍存哺乳細(xì)胞。凍存細(xì)胞前，細(xì)胞應(yīng)該特性化并檢查是否污染。
 

　　NEST細(xì)胞培養(yǎng)培養(yǎng)是指在體外模擬體內(nèi)環(huán)境(無菌、適宜溫度、酸堿度和一定營養(yǎng)條件等)，使之生存、生長、繁殖并維持主要結(jié)構(gòu)和功能的一種方法。培養(yǎng)物是單個細(xì)胞或細(xì)胞群。細(xì)胞在培養(yǎng)時都要生活在人工環(huán)境中，由于環(huán)境的改變，細(xì)胞的移動或受一些其他因素的影響，培養(yǎng)時間加長，傳代導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)單一化型。
 

　　NEST細(xì)胞培養(yǎng)下列步驟以單管凍存細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)的實驗方案為例。
 

　　1、準(zhǔn)備一燒杯37°C的水。
 

　　2、從液氮儲存中取出一管細(xì)胞，注意保護手和眼睛。
 

　　3、擰松管蓋1/4圈，等待10秒鐘以釋放螺紋中可能殘留的液氮，再重新擰緊管蓋。
 

　　4、將凍存管的下半部分置于37°C水浴中進(jìn)行解凍，直至凍存管內(nèi)僅剩余一小塊冰芯，使細(xì)胞迅速解凍。
 

　　5、用消毒液擦拭管體外表面，再將其移至II級A型層流細(xì)胞培養(yǎng)通風(fēng)櫥中。
 

　　6、打開管蓋，使用1mL移液器上下吹打細(xì)胞懸液以分散細(xì)胞。
 

　　7、從管中吸取20uL細(xì)胞懸液，并將其稀釋于20uL臺盼藍(lán)溶液中。
 

　　8、使用血細(xì)胞計數(shù)板來確定每毫升懸液中的活細(xì)胞數(shù)。
 

　　9、將管中懸液(1mL)稀釋至產(chǎn)品說明中的推薦濃度。
 

　　10、將5mL細(xì)胞懸液加入25cm2培養(yǎng)瓶，或?qū)?5mL細(xì)胞懸浮液加入75cm2培養(yǎng)瓶中。
 

　　11、搖勻培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基以*分散細(xì)胞。許多類型的細(xì)胞都會迅速貼壁，如果沒有在傳代后即刻搖勻細(xì)胞，細(xì)胞可能生長不均勻。
 

　　12、在37°C、5%CO2/95%空氣、濕度細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)細(xì)胞。為了獲得*結(jié)果，培養(yǎng)開始后至少在24小時之內(nèi)不要擾動細(xì)胞。